DHPLC System
 

簡介 使用規則 操作方式

 DHPLC System  聯絡人: 陳相如 | 分機: 35318
簡介
 

DHPLC(denaturing high performance liquid chromatography,高效能液相層析),主要用來檢測DNA突變(mutation)和單核酸多形性(SNP,single nucleotide polymorphism)的分析工具。此儀器為全自動化儀器設備能在短時間內偵測核酸片段中單一核酸的變異且可以快速分析小片段鹼基插入(insertion)和缺失 (deletion),平均一個樣本分析10分鐘,可快速縮短電泳時間。

DHPLC利用 DNA分離管柱可從事下列分析工作:

  1. Non-Denaturing(須知DNA 片段大小),亦即50℃下分析工作有:
  • Sizing of double stranded DNA up to 2000bps
  • LOH(Loss of Heterozygosity), MSI(microsatellite instability)
  • Qualitative Analysis(Q-RT-PCR)
  • PCR quality check and purification
  1. Partially Denaturing(須知DNA 片段大小及序列),亦即52~70℃下分析工作有:
  • Mutation Detection
  • SNP discovery
  1. Fully-denaturing(須知DNA 片段大小及序列),亦即70~80℃下分析工作有:
  • Oligo Quality and purification analysis
  • RNA analysis (with RNASep column)
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使用規則
 

(1) 首次使用前,請洽管理人。

(2) 需自備Buffer A~D 。

(3) 需自備 Column。

(4) 須遵守使用前準備工作及注意事項。

(5) 請確實登記「使用記錄本」。
 

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DHPLC 操作方式 - 準備工作 操作方式/ 操作手冊下載
 

WAVE SYSTEM 使用前準備工作及注意事項

A. 在每一次啟動機台前必須進行下列檢查工作

  1. 檢查Buffers、Washing Solutions 及 Waste :
    • 檢查放置Buffer A、Buffer B、Syringe Washing Solution及Cartridge Wash/Storage Solution 的瓶子中,是否有足夠的Buffers (至少要有一半)。 (如需配製,請參閱 Preparing the Buffers and Washing Solutions)
    • 檢查所有在Buffers中的Solvent Filter是否有完全深入瓶底。
    • 檢查Waste桶是否有足夠的空間儲存。
    • 檢查所有連接Buffers及Waste的管線,是否有鬆脫現象。
  2. 檢查所有設備、連接管線及配件 :
    • Interface
    • Pump
    • Constant Temperature Rack(sample plate) :
      溫度設定保持低溫(一般12-18℃),應避免水珠凝結。
    • DNASep® Cartridge and Oven:
      確定Oven溫度在40℃以上(建議設定50℃,至少10分鐘)方可將buffer注入DNASepR Cartridge。
    • Detector : WAVE system使用的UV Lamp波長為254nm或260nm。
    • Computer
  3. 檢查以上所有設備連線之D-Line及Interface。

B. 開啟系統

  1. 必須先開啟Interface的Power。
  2. 依序開啟Pump、AutoSampler、Chiller、Oven及Detector電源後,等面板上顯示”D-LINE IS NOT READY”,而Column Oven顯示”E5”。
  3. 若無法顯示”D-LINE IS NOT READY”時 :
    • 關上Power。
    • 按著UTILITY不放。
    • 開啟Power。
    • 直到顯示D-LINE選項 ”OFF” 或 ”ON” 出現後放開UTILITY
  4. 若無法顯示”E5”時 :
    • 關上Power。
    • 按著MODE不放。
    • 開啟Power。
    • 直到MODE顯示由 ”L” 轉為 ”C” 。
  5. 開啟所有的電源後,進行系統連結工作 :
    • 開啟D-7000 HSM 後,由視窗左側選項中點選 按鍵。
    • 於開啟的小視窗下方點選 ,待五個component顯示其型號時表示系統已完成連線,點選OK鍵並關閉D-7000 HSM。
    • 如果視窗內少一個或出現錯誤訊息,請重新連線或將系統電源全數重新開啟後再連線一次。
  6. 開啟Pump :
    • 開啟WAVEMARKER software,由視窗下方選項中點選 按鍵,再點選Pump On鍵;或由Pump面板上按下PUMP ON/OFF鍵啟動。
  7. 開啟Detector Lamp :
    • 開啟電源後,檢視機台面板下LAMP部份顯示“D2”或“OFF”,若為“D2”則表示LAMP ON;若為“OFF”則表示LAMP OFF。
    • 按下PARAM SET鍵,在LAMP MODE下,選擇1開啟LAMP。

C. 系統狀態檢查 (每日使用前均需進行的工作)

  1. Pump Purge (當tubing中有大於0.5公分之氣泡時) :
    • MANUAL鍵進入設定各Buffer的比例。
    • 設定完成後,將Drain Valve打開(向右旋轉),按下PURGE鍵,進行Purge程序。
    • 觀察Buffer從Drain Valve Waste Tubing流出來的情形,直到看不見任何氣泡從Tubing中產生。
    • 按下PURGE鍵終止Purge程序,關閉Drain Valve (向左旋轉),恢復正常運作。
  2. Autosampler Wash:
    • 按Autosampler面板上WASH鍵進行Wash程序至少三次(清洗Autosampler的Probe Tube Syringe)。

D. Column 保存方法:

  1. 每天短時間保存:
    作完實驗後,於50℃,0.05 ~ 0.1 ml/min下 Run 50% Buffer A,50% Buffer B,
    overnight。
  2. 小於六天保存:
    作完實驗後,於50℃,1ml/min下Run 100% Buffer D,20min。若超過三天不使用,請卸下管柱置於室溫下保存。請勿在待機模式下以100% Buffer D超過二天。
  3. 大於六天保存:
    • 作完實驗後,在50℃,1ml/min Run 100% Buffer D,至少30分鐘。
    • 拆下Column和Inline Filter,以PEEK Union連通系統管線,Inline Filter與Column室溫下保存即可;所有管線請置換成Buffer D保存。

E. Buffer 更新期限:

  • Buffer A : 自行配製約5~7天;如使用WAVE Optimized Buffer A,開封後請存放在4℃冰箱內,並請於二星期內使用完畢。
  • Buffer B : 自行配製約7~10天;如使用WAVE Optimized Buffer B,開封後請存放在4℃冰箱內,並請於二星期內使用完畢。
  • Buffer C : 15~21天。
  • Buffer D : 1個月。 
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公告日:2011/07/14





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